af)激活进行调节，以及是否可以改变这种maf激活以提高抗血管生成治疗的疗效。
1、crc中的maf高度激活
?在lm中观察到asma、p-mlc2和col-i的显着更高表达，表明maf的肌成纤维细胞和ecm重塑特征。
?接下来，从crc患者的ptucaf和lmmaf中分离出原代成纤维细胞。maf显示出asma和p-mlc2的显着上调，证实了肌成纤维细胞和细胞收缩性信号的增加。fas的量化显示mafs中fas的平均面积更大(图l和m)，支持crcmafs被高度激活。
2、晚期crc患者的ecm重构和硬化特征
?为了鉴定与肝转移相关的基因表达特征，我们对crc患者的ptu和lm进行了rna测序(rna-seq)。使用通路相互作用数据库pid对lm中上调基因进行的基因集分析gsa揭示了整合素信号传导的显着富集。为了进一步表征成纤维细胞的基因表达，我们在成功富集后对分离的原代caf和maf进行了rna-seq。
?我们鉴定了3，721个差异表达的基因。go确定了maf中上调的肌成纤维细胞ecm重塑特征。kegg确定了ecm-受体相互作用和fa特征和pid确定了整合素信号(图h)。此外，基因集富集分析gsea还揭示了差异表达基因的肌动蛋白介导的细胞收缩、fa、ecm成分、肌生成和血管生成特征的强烈富集(图i-m)。
3、mafs增加微环境硬度，支持血管生成
?我们进行了凝胶重塑分析，并观察到maf显示出更密集、更复杂的f-肌动蛋白网络(图a)，并且可以比caf更大程度地收缩凝胶(图b)。在新鲜和冷冻保存的组织中，我们观察到lm的基质硬度显着增加(图c-d)。基质硬度与来自同一患者的样本中的col-i、asma和p-mlc2表达相关(图e-g)。
?基质硬化调节ec增殖、血管生成、血管生长和分支，为了研究这种联系，我们评估了lm中的脉管系统，并观察了基质硬度和cd31血管面积之间的相关性(图h)。当在凝胶内培养时，允许成纤维细胞重塑基质，mafs诱导ec发芽的程度显着高于cafs(图i-k)。因此，maf支持伴随局部ecm重塑的细胞因子产生血管生成。
4、肾素-血管紧张素系统抑制目标成纤维细胞
?对新鲜